کیت MTT

برای چنین اهدافی روش­های متعددی می­توانند مورد استفاده قرار گیرند اما روش­های غیرمستقیم با استفاده از نشانگرهای فلورسنت یا رنگ­زا (کروموژن)، روش­هایی بسیار سریع در مقیاس بزرگ را فراهم می ­کنند. از میان این روش­ها، سنجش بقای سلولی به روش MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) پرکاربردترین روش محسوب می­ شود. این روش، یک روش رنگ سنجی برای بررسی تکثیر و بقای سلول­ها است که در سال 1983 توسط Mossman معرفی گردید.

اساس این روش مبتنی بر فعالیت میتوکندری می­ باشد. فعالیت میتوکندریایی در سلول­های زنده به صورت پایدار است و بنابراین افزایش یا کاهش تعداد سلول­های زنده به صورت خطی با فعالیت میتوکندری در ارتباط می­ باشد. رنگ تترازولیموم MTT در سلول­های فعال (به لحاظ متابولیکی)، إحیا می­ شود. دهیدروژنازهای میتوکندریایی در سلول­های زنده، حلقۀ تترازولیوم را شکسته و با تولید NADH و NADPH منجربه تشکیل رسوب نامحلول ارغوانی رنگ به نام فورمازان می­شوند. این رسوب می­تواند توسط ایزوپروپانول یا دی متیل سولفواکسید حل شود. از سوی دیگر، سلول­های مرده، چنین توانایی را نداشته و بنابراین سیگنالی را نشان نمی­ دهند. در این روش، تشکیل رنگ به عنوان نشانگر سلول­های زنده مورد استفاده قرار می ­گیرد. شدت رنگ تولید شده، در طول موج 540 تا 630 نانومتر اندازه­ گیری می­ شود و به طور مستقیم با تعداد سلول­های زنده متناسب است.

کاربردهای مهم این روش عبارتند از :

• اندازه ­گیری تکثیر سلولی در پاسخ به عوامل رشد، سایتوکاین­ها، میتوژن­ها و مواد مغذی
•      تجزیه و تحلیل ترکیبات کشندۀ سلول یا متوقف کنندۀ رشد سلول مانند داروهای ضد سرطان، سموم، آلاینده­های محیط زیست و سایر عوامل دارویی
• ارزیابی واسطه­ های فیزیولوژیک و آنتی­بادی­های مهار کنندۀ رشد سلولی
•      کشف دارو، غربالگری داروهای سمی و ضد سرطان
•      مطالعۀ فعالیت سلول
•      بررسی اتصالات سلولی
•      مطالعات سمیّت شیمیایی

ایمنی بالا و فراهم نمودن یک سیستم رنگ سنجی و غیر رادیواکتیو از مزایای مهم این روش محسوب می­ شوند. استفاده از این کیت بسیار راحت است، حساسیت و دقت بالایی دارد و کمتر از 950 سلول را می­تواند شناسایی کند. از سوی دیگر بازدهی بالایی برای اندازه­گیری تکثیر، بقاء و مرگ و میر سلولی دارد و روش اجرای آن نیازی به مراحل وقت گیر شستشو و انتقال از یک پلیت به پلیت دیگر را ندارد. نمونه­های مورد بررسی در این روش عبارتند از سلول­های چسبنده یا معلق و سلول­های تکثیر شونده یا غیر تکثیر شونده.

کیت سنجش MTT محصول کمپانی زلبیو آلمان، روشی ساده، ارزان، حساس و تکرارپذیر را برای بررسی میزان بقای سلول­ها در محیط کشت سلولی و مطالعات دارویی فراهم می کند. این کیت، سنجش بقای سلول­ها را به روش رنگ سنجی و در طول موج 570 نانومتر و طول موج مرجع 630 نانومتر انجام می ­دهد. در نهایت، با استفاده از مقادیر جذب نوری، محقق قادر به ارائۀ منحنی درصد بقای سلول­ها در مقابل غلظت ترکیب مورد مطالعه خواهد بود. این کیت برای انجام 1000 تست طراحی شده است و کیفیت آن با نمونه ­های مشابه آمریکایی برابری کرده و به لحاظ قیمت بسیار کم هزینه­تر از نمونه­ های مشابه می­ باشد.